Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZDHHC2: sc-403195-ACT

ZDHHC2 code une palmitoyltransférase de la famille DHHC qui catalyse la S‑palmitoylation de protéines cibles, modulant leur association à la membrane, leur stabilité, leur trafic intracellulaire et leur capacité de signalisation. Grâce à des cycles dynamiques de palmitoylation, ZDHHC2 contribue à la régulation du transport vésiculaire, de la signalisation synaptique et immunitaire, ainsi qu’à l’organisation de microdomaines membranaires qui influencent l’activité des voies en aval. Des altérations de l’activité de ZDHHC2 et de l’homéostasie de la palmitoylation ont été associées à une dérégulation de réseaux de signalisation cellulaire impliqués dans la biologie des cancers et dans des processus neurologiques, ce qui en fait un point d’entrée utile pour étudier comment les modifications lipidiques ajustent la fonction des protéines. En tant qu’enzyme humaine agissant au niveau des membranes, ZDHHC2 est souvent étudiée conjointement avec la machinerie de palmitoylation/dépalmitoylation et des substrats propres à certaines voies afin de cartographier les conséquences fonctionnelles de cette lipidation post‑traductionnelle.

ZDHHC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZDHHC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZDHHC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZDHHC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZDHHC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZDHHC2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZDHHC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZDHHC2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZDHHC2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZDHHC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.