ZCCHC11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411714

Übersicht

ZCCHC11 (auch als TUT4 bekannt) kodiert eine CCHC-Zinkfinger-RNA-Uridyltransferase, die die 3′-terminale Uridylierung verschiedener RNA-Substrate katalysiert, darunter Vorläufer- und reife MikroRNAs sowie ausgewählte mRNAs. Durch die Modifikation der 3′-Enden von RNAs beeinflusst ZCCHC11 die RNA-Stabilität und Abbauwege, die miRNA-Biogenese und die posttranskriptionelle Genregulation; dabei besteht ein funktionelles Zusammenspiel mit der LIN28-abhängigen Kontrolle von miRNAs der let-7-Familie. Diese Aktivität verknüpft ZCCHC11 mit regulatorischen Programmen, die Differenzierung, Proliferation und die stressresponsive Umgestaltung des Transkriptoms steuern. Eine fehlregulierte Expression oder Aktivität von ZCCHC11 wurde im Zusammenhang mit aberranten miRNA-Netzwerken und onkogenen Signalwegen untersucht, was das Gen für mechanistische Studien in der Krebsbiologie und im RNA-Stoffwechsel relevant macht.

Das ZCCHC11 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZCCHC11-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZCCHC11-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZCCHC11 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZCCHC11-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZCCHC11-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZCCHC11-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZCCHC11-Exone abzielen, die für die ZCCHC11-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZCCHC11-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZCCHC11 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZCCHC11 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZCCHC11-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZCCHC11 HDR-Plasmid (h) und ZCCHC11 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZCCHC11-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZCCHC11-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.