Zap-70 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400826

Descripción general

ZAP70 codifica Zap-70, una tirosina cinasa citoplasmática esencial para la señalización proximal del receptor de células T (TCR) aguas abajo de la fosforilación de las cadenas CD3/ζ por LCK. Tras su reclutamiento a los ITAM fosforilados, Zap-70 fosforila proteínas adaptadoras como LAT y SLP-76, coordinando el ensamblaje de señalosomas que propagan la activación de PLCγ1, el flujo de Ca²⁺, las cascadas MAPK, los programas transcripcionales de NF-κB/NFAT y la remodelación del citoesqueleto. Estas vías controlan la selección de timocitos, la activación de las células T, la diferenciación y las funciones efectoras, vinculando la actividad de ZAP70 con la homeostasis inmunitaria. La alteración de la expresión de ZAP70 o de la dinámica de su señalización se ha asociado con fenotipos de inmunodeficiencia y con una activación linfocitaria desregulada observada en contextos de enfermedades autoinmunes y hematológicas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Zap-70 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ZAP70 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ZAP70 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ZAP70 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Zap-70.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ZAP70 para la investigación de la señalización de Zap-70, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ZAP70 críticos para la función de Zap-70
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ZAP70 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Zap-70 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Zap-70 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ZAP70. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Zap-70 (h) y el plásmido HDR Zap-70 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ZAP70 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ZAP70 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.