Plásmido Doble Nickase (m) YY1: sc-423752-NIC

El gen Yy1 de ratón codifica el factor de transcripción multifuncional YY1, una proteína de unión al ADN con dedos de zinc que puede actuar tanto como activador como represor de la transcripción según el contexto de la cromatina. YY1 participa en la comunicación entre promotores y potenciadores (enhancers), en el silenciamiento génico asociado a Polycomb y en la regulación de la transcripción por la ARN polimerasa II, vinculándose así a procesos como el control del ciclo celular, la diferenciación y la especificación de linaje. A través de interacciones con remodeladores de cromatina y complejos modificadores de histonas, YY1 influye en estados epigenéticos y en la organización del genoma, incluidos roles en la función de enhancers y en el plegamiento tridimensional de la cromatina. La actividad desregulada de YY1 se ha asociado con programas transcripcionales alterados relevantes para anomalías del desarrollo, la regulación inmunitaria y vías oncogénicas, lo que convierte a Yy1 en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos de regulación génica.

YY1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Yy1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Yy1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Yy1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Yy1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.