Plasmide CRISPR d'Activation (h) YT521-B: sc-406333-ACT

Le gène humain **YTHDC1** code **YT521-B**, un lecteur nucléaire du domaine YTH de la **N6‑méthyladénosine (m6A)**, qui couple la méthylation de l’ARN à l’épissage du pré‑ARNm, à l’export de l’ARNm et au métabolisme nucléaire des ARN. En se liant aux transcrits modifiés par m6A et en coordonnant le choix des sites d’épissage avec des facteurs d’épissage riches en sérine/arginine, YT521-B contribue à façonner le profil des isoformes de transcrits et les programmes d’expression génique. La régulation dépendante de YTHDC1 s’articule avec le traitement des ARN associé à la chromatine et avec des réseaux transcriptionnels répondant au stress, qui influencent le contrôle du cycle cellulaire et la différenciation. Une signalisation m6A dérégulée et des profils d’épissage anormaux impliquent des voies associées à YTHDC1 dans des états transcriptionnels oncogéniques et des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui soutient des études mécanistiques dans des modèles pertinents pour les maladies.

YT521-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de YTHDC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

YT521-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus YTHDC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription YTHDC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de YT521-B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus YTHDC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de YT521-B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie YT521-B dans les cellules tumorales présentant une expression de YTHDC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.