YME1L1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424248

Descripción general

Yme1l1 codifica YME1L1, una metaloproteasa i-AAA dependiente de ATP incrustada en la membrana interna mitocondrial que realiza control de calidad al degradar proteínas mal plegadas o dañadas y al procesar reguladores clave de la dinámica mitocondrial. Al controlar el recambio de sustratos implicados en la fusión de la membrana interna dependiente de OPA1, la integridad de la cadena respiratoria y la proteostasis, YME1L1 ayuda a mantener la arquitectura de las crestas y la función bioenergética mitocondrial. La pérdida o desregulación de YME1L1 altera la mitofagia, incrementa la señalización de estrés mitocondrial y puede promover la fragmentación, cambios en la fosforilación oxidativa y una mayor susceptibilidad a la apoptosis. Estos procesos son ampliamente relevantes en modelos de neurodegeneración, disfunción cardiometabólica y otros trastornos vinculados a una homeostasis mitocondrial alterada.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO YME1L1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Yme1l1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Yme1l1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Yme1l1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína YME1L1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Yme1l1 para la investigación de la señalización de YME1L1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Yme1l1 críticos para la función de YME1L1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Yme1l1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido YME1L1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido YME1L1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Yme1l1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR YME1L1 (m) y el plásmido HDR YME1L1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Yme1l1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Yme1l1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.