Plasmide CRISPR/Cas9 KO XRCC2 (h): sc-403531

Présentation

XRCC2 code un paralogue de RAD51 qui intervient dans la réparation par recombinaison homologue (RH) des cassures double brin de l’ADN, en soutenant l’assemblage et la stabilisation du filament de RAD51 lors de l’invasion de brin. Cette protéine est essentielle au maintien de l’intégrité des fourches de réplication et à la résolution des dommages à l’ADN issus du stress réplicatif, avec des liens fonctionnels étroits avec la voie de l’anémie de Fanconi et, plus largement, les réseaux de maintenance du génome. La perturbation de XRCC2 diminue la capacité de RH, accroît l’instabilité chromosomique et augmente la sensibilité aux agents de pontage de l’ADN, associant le dysfonctionnement de XRCC2 à une prédisposition au cancer et à des phénotypes apparentés de déficit de réparation de l’ADN. En tant que facteur central de la RH, XRCC2 est fréquemment étudié dans les mécanismes de stabilité du génome, les processus mutagènes et la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO XRCC2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène XRCC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du XRCC2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert XRCC2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine XRCC2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en XRCC2 pour l'étude de la signalisation de XRCC2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de XRCC2 essentiels à la fonction de XRCC2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de XRCC2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le XRCC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le XRCC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus XRCC2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le XRCC2 plasmide HDR (h) et le XRCC2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie XRCC2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles XRCC2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.