Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
XPG Double Nickaseプラスミド (h): sc-416940-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- XPG Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- XPGダブルニカースプラスミド（h）およびXPGダブルニカースプラスミド（h2）は、ERCC5を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: XPG 抗体 (8H7): sc-13563
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
XPG Double Nickaseプラスミド (h) | sc-416940-NIC | 20 µg | $410.00 |
ERCC5は、損傷DNAを病変を含むバブル構造の3′側で切断する、ヌクレオチド除去修復（NER）に必須の構造特異的ヌクレアーゼXPGをコードしています。XPGはTFIIHを中心とする修復複合体内で機能し、UVによる光産物や嵩高い付加体を除去することでゲノム安定性を支え、複製ストレスや変異の蓄積を抑えます。典型的なNERに加えて、XPGは転写共役修復や、ATR/CHK1シグナル伝達と交差するRループなどのDNA二次構造の処理にも関与することが示されています。病原性のあるERCC5機能不全は、DNA損傷応答の障害と細胞機能低下の加速を特徴とする疾患と関連しており、DNA修復生物学における遺伝子型—表現型関係を研究するうえで重要な結節点となります。
XPG ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ERCC5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ERCC5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ERCC5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ERCC5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。