WWOX CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403070-ACT

WWOX (WW-Domänen-haltende Oxidoreduktase) kodiert ein mit Tumorsuppression assoziiertes Protein, das auf die häufige fragile Stelle FRA16D kartiert ist und an der Aufrechterhaltung der Genomstabilität beteiligt ist. Das humane WWOX ist Teil von Signalnetzwerken, die Apoptose, DNA-Schadensantworten und zelluläre Stresswege integrieren. Dies wird unter anderem durch WW-Domänen-vermittelte Interaktionen mit prolinreichen Partnern sowie durch die Modulation von Transkriptionsregulatoren vermittelt. Eine veränderte WWOX-Expression oder ein Funktionsverlust wurde in verschiedenen Geweben mit onkogener Transformation und metastatischen Phänotypen in Verbindung gebracht; genetische Störungen sind außerdem mit neurologischen Entwicklungsstörungen einschließlich epileptischer Enzephalopathie assoziiert. Diese Eigenschaften machen WWOX zu einem häufig untersuchten Knotenpunkt in Signalwegen, die Proliferation, Differenzierung und Zelltod steuern.

WWOX Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen WWOX-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

WWOX Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des WWOX-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der WWOX-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen WWOX-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native WWOX-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von WWOX-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des WWOX-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem WWOX-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.