WRN Double Nickaseプラスミド (h): sc-401860-NIC

WRNはRecQファミリーに属するDNAヘリカーゼ／エキソヌクレアーゼをコードしており、DNA複製、組換え、および塩基除去修復や相同組換えを含む複数のDNA修復過程を協調的に制御します。WRNは複製フォークの安定性を支え、テロメア維持にも関与することで、S期および複製ストレス応答時のゲノム完全性に寄与します。WRN機能の喪失はウェルナー症候群と関連し、早期の細胞老化、染色体不安定性、ならびにDNA損傷シグナル伝達の変化と結び付いています。WRNはまた、マイクロサテライト不安定性の文脈における役割や、ATR/ATMシグナル伝達、PARP依存的修復、チェックポイント制御との経路間相互作用についても研究されています。

WRN ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における WRN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、WRN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、WRNの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、WRNが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。