Wnt-15 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406368

Descripción general

WNT9B codifica la glicoproteína secretada Wnt-15, un ligando que activa la señalización Wnt para regular la especificación del destino celular, la proliferación, la polaridad y el patrón de los tejidos durante el desarrollo. Mediante interacciones con receptores Frizzled y correceptores, Wnt-15 puede influir tanto en programas transcripcionales dependientes de β-catenina como en vías no canónicas que controlan la dinámica del citoesqueleto y la migración direccional. La actividad de WNT9B está implicada en gradientes de morfógenos que modelan la organogénesis, y la desregulación de la señalización Wnt se asocia de forma general con anomalías congénitas y procesos oncogénicos. En modelos celulares humanos, WNT9B ofrece un punto de entrada manejable para desentrañar la interacción (cross-talk) de la vía con la señalización por factores de crecimiento y con redes transcripcionales que gobiernan la diferenciación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Wnt-15 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen WNT9B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del WNT9B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de WNT9B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Wnt-15.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en WNT9B para la investigación de la señalización de Wnt-15, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de WNT9B críticos para la función de Wnt-15
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de WNT9B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Wnt-15 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Wnt-15 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus WNT9B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Wnt-15 (h) y el plásmido HDR Wnt-15 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología WNT9B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana WNT9B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.