Wnt-10b Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-423710-ACT-2

O gene Wnt10b de camundongo codifica a glicoproteína secretada Wnt-10b, um ligante canônico de Wnt que ativa complexos de receptores Frizzled/LRP para promover a estabilização da β-catenina e a transcrição dependente de TCF/LEF. A Wnt-10b regula o padrão embrionário e a homeostase de tecidos adultos ao controlar decisões de destino celular, proliferação e diferenciação, com funções bem estabelecidas na osteoblastogênese, na supressão da adipogênese e na biologia dos folículos pilosos e da glândula mamária. A desregulação da sinalização de Wnt10b tem sido associada a alterações na massa óssea, a fenótipos metabólicos e do tecido adiposo e à ativação da via Wnt relacionada a tumores de maneira dependente do contexto, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos da dinâmica Wnt/β-catenina. A edição gênica de Wnt10b em células ou modelos murinos permite a dissecação funcional da sinalização Wnt específica de ligante, do crosstalk entre vias e de fenótipos de desenvolvimento ou metabólicos usando ensaios com repórteres, sistemas de diferenciação e análises de linhagem in vivo.

Wnt-10b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Wnt10b sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wnt-10b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Wnt10b em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Wnt10b, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wnt-10b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Wnt10b nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wnt-10b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wnt-10b em células tumorais com expressão de Wnt10b silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.