Plásmido CRISPR de Activación (m2) Wnt-10b: sc-423710-ACT-2

El gen murino Wnt10b codifica la glicoproteína secretada Wnt-10b, un ligando canónico de Wnt que activa complejos receptores Frizzled/LRP para favorecer la estabilización de la β-catenina y la transcripción dependiente de TCF/LEF. Wnt-10b regula el patrón embrionario y la homeostasis de los tejidos adultos al controlar decisiones de destino celular, proliferación y diferenciación, con funciones bien establecidas en la osteoblastogénesis, la supresión de la adipogénesis y la biología del folículo piloso y la glándula mamaria. La desregulación de la señalización de Wnt10b se ha asociado con cambios en la masa ósea, fenotipos metabólicos y del tejido adiposo, y una activación de la vía Wnt relacionada con tumores dependiente del contexto, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la dinámica de Wnt/β-catenina. La edición genética de Wnt10b en células o modelos murinos permite diseccionar funcionalmente la señalización Wnt específica de ligando, el crosstalk entre vías y fenotipos del desarrollo o metabólicos mediante ensayos con reporteros, sistemas de diferenciación y análisis de linaje in vivo.

Wnt-10b El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Wnt10b sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Wnt-10b El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Wnt10b en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Wnt10b, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Wnt-10b. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Wnt10b y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Wnt-10b en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Wnt-10b en células tumorales con expresión de Wnt10b silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.