Wnt-10b CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401465-ACT

WNT10B kodiert das sezernierte Glykoprotein Wnt-10b, einen lipidmodifizierten Liganden, der Frizzled/LRP-Rezeptorkomplexe aktiviert, um kanonische Wnt/β‑Catenin-abhängige Transkriptionsprogramme sowie kontextabhängige nichtkanonische Signalwege zu regulieren. Wnt-10b beeinflusst Entscheidungen über das Zellschicksal, Proliferation und Differenzierung, mit wichtigen Funktionen in Osteogenese und Adipogenese sowie in der epithelial-stromalen Wechselwirkung während der Entwicklung und des Gewebeumbaus. Eine fehlregulierte WNT10B-Expression oder veränderte Signalstärke kann β‑Catenin-abhängige Genexpressionsnetzwerke stören und das Crosstalk mit TCF/LEF-, BMP- und Notch-assoziierten Prozessen verändern. Solche Signalwegveränderungen werden häufig in Modellen von gestörter Wachstumskontrolle, fibroseassoziiertem Remodeling und Tumorbiologie untersucht, in denen die Aktivität des Wnt-Signalwegs stamzellähnliche Phänotypen und Reaktionen des Mikromilieus moduliert.

Wnt-10b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen WNT10B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Wnt-10b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des WNT10B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der WNT10B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Wnt-10b-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native WNT10B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Wnt-10b-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Wnt-10b-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem WNT10B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.