Plasmide CRISPR/Cas9 KO Wee 1 (m): sc-423702

Présentation

Wee1 murin code la protéine kinase WEE1, un régulateur central du point de contrôle G2/M qui freine l’activité de CDK1 par phosphorylation inhibitrice afin d’empêcher une entrée prématurée en mitose. En intégrant les signaux des voies de dommages à l’ADN et de stress de réplication médiées par ATR/CHK1, WEE1 contribue à coordonner l’intégrité du génome avec la progression du cycle cellulaire. La perturbation de Wee1 peut modifier le contrôle des points de contrôle, la tolérance au stress de réplication et la fidélité mitotique, des processus fréquemment impliqués dans la biologie tumorale et d’autres troubles prolifératifs. Wee1 est donc largement étudié dans les mécanismes de régulation du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les interactions de létalité synthétique avec d’autres facteurs de points de contrôle et de réparation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Wee 1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Wee1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Wee1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Wee1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Wee 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Wee1 pour l'étude de la signalisation de Wee 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Wee1 essentiels à la fonction de Wee 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Wee1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Wee 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Wee 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Wee1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Wee 1 plasmide HDR (m) et le Wee 1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Wee1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Wee1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.