WDR20 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418266-ACT

WDR20 codifica uma proteína regulatória contendo repetições WD que atua como fator acessório de complexos enzimáticos desubiquitinantes, ajudando a ajustar o controle dependente de ubiquitina sobre a estabilidade proteica e a sinalização. Ao modular a atividade de desubiquitinação, WDR20 pode influenciar a proteostase, a duração de vias de receptores e quinases e programas transcricionais a jusante que moldam o crescimento celular e as respostas ao estresse. A desregulação da sinalização por ubiquitina e da regulação de desubiquitinases está amplamente associada à sinalização oncogênica, à neurobiologia e à homeostase imune, tornando o WDR20 um nó útil para estudar o redirecionamento de vias em modelos de células humanas. Investigar o WDR20 apoia trabalhos mecanísticos sobre a dinâmica da ubiquitina, o feedback de vias em nível de rede e a regulação contexto-específica da amplitude de sinalização.

WDR20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WDR20 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WDR20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WDR20 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WDR20, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WDR20. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WDR20 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WDR20 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WDR20 em células tumorais com expressão de WDR20 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.