Plasmide CRISPR d'Activation (h) WDR20: sc-418266-ACT

WDR20 code une protéine régulatrice contenant des répétitions WD, qui agit comme facteur accessoire des complexes d’enzymes déubiquitinantes, contribuant à ajuster le contrôle, dépendant de l’ubiquitine, de la stabilité des protéines et de la signalisation. En modulant l’activité de déubiquitination, WDR20 peut influencer la protéostasie, la durée d’activation des voies des récepteurs et des kinases, ainsi que les programmes transcriptionnels en aval qui façonnent la croissance cellulaire et les réponses au stress. La dérégulation de la signalisation par l’ubiquitine et de la régulation des déubiquitinases est largement associée à la signalisation oncogénique, à la neurobiologie et à l’homéostasie immunitaire, ce qui fait de WDR20 un nœud utile pour étudier le recâblage des voies dans des modèles de cellules humaines. L’étude de WDR20 soutient des travaux mécanistiques sur la dynamique de l’ubiquitine, les rétrocontrôles de voies à l’échelle des réseaux et la régulation contextuelle de l’amplitude des signaux.

WDR20 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WDR20 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WDR20 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WDR20 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WDR20, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WDR20. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WDR20 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WDR20 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WDR20 dans les cellules tumorales présentant une expression de WDR20 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.