WAPL Double Nickase Plasmid (m): sc-432331-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das WAPL Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- WAPL Double-Nickase-Plasmid (m) und WAPL Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Wapl abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
WAPL Double Nickase Plasmid (m) | sc-432331-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
WAPL Double Nickase Plasmid (m2) | sc-432331-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen *Wapl* kodiert WAPL, einen Cohesin-Freisetzungsfaktor, der das Öffnen des Cohesin-Rings fördert und die Verweildauer von Cohesin auf dem Chromatin reguliert. Durch die Kontrolle der Cohesin-Dynamik beeinflusst WAPL die Kohäsion der Schwesterchromatiden, den mitotischen Ablauf, das Timing der DNA-Replikation sowie die höhergeordnete Genomorganisation, die Transkriptionsprogramme prägt. Die WAPL-Funktion ist mit Signalwegen verknüpft, die Chromosomensegregation, DNA-Schadensantworten und die Bildung von Chromatinschleifen steuern, und stellt damit einen zentralen Knotenpunkt für die Genomstabilität dar. Eine fehlregulierte Cohesin-Umsetzung und veränderte WAPL-Aktivität wurden mit Aneuploidie, Replikationsstress und entwicklungsbezogenen Phänotypen im Zusammenhang mit Cohesinopathien in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz in Krankheitsmodellen unterstreicht.
WAPL Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Wapl-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Wapl abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Wapl-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Wapl-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.