VWA5B2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406578

Descripción general

VWA5B2 codifica una proteína que contiene un dominio tipo A del factor von Willebrand (VWA), un motivo modular que a menudo participa en interacciones proteína–proteína que sustentan la organización de la matriz extracelular, la señalización relacionada con la adhesión y la arquitectura tisular. Aunque VWA5B2 está menos caracterizado que muchas proteínas con dominio VWA, su composición de dominios predicha sugiere funciones en el anclaje o andamiaje de complejos que influyen en la adhesión celular, la motilidad y la mecanotransducción. La alteración de la regulación de la adhesión y de los procesos asociados a la matriz se vincula con frecuencia a un control del crecimiento desregulado y a fenotipos invasivos, lo que convierte a VWA5B2 en una diana útil para investigar vías que conectan las interacciones célula–matriz con la expresión génica y la dinámica del citoesqueleto. Por tanto, la perturbación genética de VWA5B2 puede ayudar a definir su contribución a respuestas al estrés dependientes del contexto y a la reorganización de redes observada en estados celulares relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VWA5B2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VWA5B2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VWA5B2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VWA5B2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VWA5B2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VWA5B2 para la investigación de la señalización de VWA5B2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de VWA5B2 críticos para la función de VWA5B2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VWA5B2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VWA5B2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido VWA5B2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VWA5B2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VWA5B2 (h) y el plásmido HDR VWA5B2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VWA5B2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VWA5B2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.