VPS54 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-434184
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- VPS54 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico VPS54, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:VPS54 Anticorpo (B-4): sc-398300
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
VPS54 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-434184 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Vps54 codifica a VPS54, uma subunidade central do complexo de ancoragem GARP (Golgi-associated retrograde protein), que promove o tráfego retrógrado do endossomo para a rede trans-Golgi e dá suporte à organização adequada do Golgi. Ao coordenar a captura e a fusão de vesículas, a VPS54 ajuda a manter a reciclagem de proteínas de membrana, a triagem de cargas dependente de glicosilação e a homeostase geral da via secretória. A disrupção de componentes do GARP perturba o transporte endolisossomal, desencadeia respostas celulares ao estresse e pode alterar vias de manutenção neuronal devido a defeitos no tráfego e na integridade de organelas. Como o tráfego de membranas está intimamente acoplado à proteostase e à sinalização, Vps54 é frequentemente investigado em estudos de mecanismos relevantes para o neurodesenvolvimento e para a neurodegeneração.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VPS54 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Vps54 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Vps54, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Vps54 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VPS54.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Vps54 para a investigação da sinalização de VPS54, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Vps54 críticos para a função VPS54
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Vps54 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo VPS54 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo VPS54 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Vps54. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo VPS54 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR VPS54 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Vps54 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Vps54 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.