VPS54 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-434184
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- VPS54 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico VPS54, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: VPS54 Anticuerpo (B-4): sc-398300
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
VPS54 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-434184 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Vps54 codifica VPS54, una subunidad central del complejo de anclaje GARP (proteína retrógrada asociada al Golgi), que promueve el tráfico retrógrado desde los endosomas hacia la red trans-Golgi y contribuye a la correcta organización del aparato de Golgi. Al coordinar la captura y fusión de vesículas, VPS54 ayuda a mantener el reciclaje de proteínas de membrana, la clasificación de carga dependiente de la glicosilación y la homeostasis general de la vía secretora. La alteración de los componentes de GARP perturba el transporte endolisosomal, desencadena respuestas de estrés celular y puede modificar vías de mantenimiento neuronal debido a defectos en el tráfico y en la integridad de los orgánulos. Dado que el tráfico de membranas está estrechamente acoplado a la proteostasis y a la señalización, Vps54 se examina con frecuencia en estudios de mecanismos relevantes para el neurodesarrollo y la neurodegeneración.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO VPS54 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Vps54 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Vps54 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Vps54 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VPS54.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Vps54 para la investigación de la señalización de VPS54, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Vps54 críticos para la función de VPS54
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Vps54 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido VPS54 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido VPS54 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Vps54. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VPS54 (m) y el plásmido HDR VPS54 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Vps54 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Vps54 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.