Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
VPS39 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404507
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- VPS39 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico VPS39, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: VPS39 Anticuerpo (C-5): sc-514762
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
VPS39 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404507 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
VPS39 codifica una subunidad central del complejo de anclaje HOPS, que media la fusión entre endosomas tardíos y lisosomas, así como entre autofagosomas y lisosomas, favoreciendo la maduración endolisosomal y la degradación de la carga. Mediante la coordinación del anclaje de membranas dependiente de GTPasas Rab y la fusión impulsada por SNARE, VPS39 contribuye a la homeostasis lisosomal, al recambio de receptores y al flujo de la macroautofagia. La alteración de componentes de HOPS perturba el tráfico vesicular y puede provocar la acumulación de material no degradado, cambios en la señalización desde los endosomas y respuestas de estrés vinculadas a fenotipos similares a enfermedades neurodegenerativas y de almacenamiento lisosomal. Por ello, VPS39 es relevante para la investigación sobre la autofagia, la dinámica endolisosomal y los defectos de tráfico intracelular asociados a enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO VPS39 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VPS39 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VPS39 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VPS39 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VPS39.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VPS39 para la investigación de la señalización de VPS39, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de VPS39 críticos para la función de VPS39
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VPS39 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido VPS39 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido VPS39 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VPS39. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VPS39 (h) y el plásmido HDR VPS39 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VPS39 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VPS39 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.