Plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS33B (h): sc-406200

Présentation

VPS33B code un composant central de la machinerie d’amarrage de classe C/VPS, qui coordonne l’amarrage des vésicules et la fusion dépendante des SNARE au sein du système endolysosomal. Il agit avec VPS16 et des partenaires apparentés pour réguler la maturation des endosomes, la biogenèse des lysosomes et le trafic membranaire polarisé, influençant ainsi le tri des protéines, leur recyclage et le flux de dégradation. La perturbation de VPS33B altère la polarité épithéliale et l’organisation de la voie sécrétoire, et a été associée à des troubles multisystrémiques du trafic intracellulaire, notamment le syndrome ARC, ce qui en fait un acteur pertinent pour l’étude de la dynamique membranaire et de l’homéostasie des organites. Dans les tissus immunitaires et de barrière, une activité modifiée de VPS33B peut affecter la gestion des granules/vésicules et la composition des protéines membranaires, le reliant à des questions plus larges d’inflammation et d’intégrité tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS33B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VPS33B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VPS33B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VPS33B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VPS33B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VPS33B pour l'étude de la signalisation de VPS33B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VPS33B essentiels à la fonction de VPS33B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VPS33B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VPS33B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le VPS33B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VPS33B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VPS33B plasmide HDR (h) et le VPS33B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VPS33B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VPS33B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.