Plásmido CRISPR de Activación (h) VPRBP: sc-403283-ACT

DCAF1 humano, también conocido como VPRBP, codifica un receptor de sustratos para el complejo ligasa E3 de ubiquitina CUL4–DDB1, que dirige la ubiquitinación y el recambio proteasomal de diversas proteínas nucleares. Mediante esta función adaptadora, VPRBP ayuda a coordinar el licenciamiento de la replicación del ADN, la regulación de la cromatina, las respuestas al daño del ADN y la progresión del ciclo celular, conectando la proteostasis mediada por ubiquitina con el control transcripcional. VPRBP también se ha implicado en la comunicación cruzada de señalización con quinasas y en programas inmunitarios y de respuesta al estrés a través de la degradación regulada de componentes de estas vías. La desregulación de la ubiquitinación dependiente de DCAF1/VPRBP se asocia con proliferación alterada y mantenimiento del genoma, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la señalización oncogénica, la regulación génica dependiente de la cromatina y las interacciones hospedador–patógeno.

VPRBP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DCAF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

VPRBP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DCAF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DCAF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de VPRBP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DCAF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de VPRBP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía VPRBP en células tumorales con expresión de DCAF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.