VMA21 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407112

Descripción general

VMA21 codifica una chaperona de membrana del retículo endoplásmico (RE) necesaria para el ensamblaje del sector V0 de la H+-ATPasa vacuolar (V-ATPasa), un motor central de la acidificación de orgánulos. Al permitir una biogénesis y un tráfico adecuados de la V-ATPasa, VMA21 contribuye al control del pH lisosomal y endosomal, al flujo autofágico, al reciclaje de receptores y a vías más amplias de proteostasis vinculadas al control de calidad del RE. La alteración de VMA21 perturba procesos dependientes de la acidificación y la homeostasis celular, lo que aporta una conexión mecanística con respuestas al estrés y con la disfunción de vías degradativas. Variantes patogénicas en VMA21 se han asociado con la miopatía ligada al cromosoma X con autofagia excesiva, lo que subraya su relevancia para el mantenimiento de las células musculares y la regulación de la vía lisosoma–autofagia.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VMA21 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VMA21 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VMA21 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VMA21 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VMA21.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VMA21 para la investigación de la señalización de VMA21, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de VMA21 críticos para la función de VMA21
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VMA21 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VMA21 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido VMA21 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VMA21. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VMA21 (h) y el plásmido HDR VMA21 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VMA21 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VMA21 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.