Plasmide Double Nickase (h) vinculin: sc-400227-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) vinculin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide vinculin Double Nickase (h) et le plasmide vinculin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant VCL. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: vinculin Antibody (7F9): sc-73614
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) vinculin | sc-400227-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) vinculin | sc-400227-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VCL code la vinculine, un adaptateur du cytosquelette qui couple les intégrines et les cadhérines au réseau d’actine au niveau des adhésions focales et des jonctions d’adhérence, stabilisant les contacts cellule–matrice et cellule–cellule. La vinculine participe à la mécanotransduction en répondant aux forces de tension et en coordonnant l’assemblage des complexes d’adhérence, influençant l’étalement cellulaire, la traction et la migration. Grâce à ses interactions avec la taline, la paxilline, l’α-actinine et la F‑actine, elle intègre des voies de signalisation liées aux GTPases de la famille Rho, au remodelage de l’actine et au renouvellement des adhérences. Des altérations de l’expression de VCL ou de la dynamique des adhérences ont été associées à une diminution de l’intégrité tissulaire et à des phénotypes de remodelage, et sont fréquemment étudiées dans des contextes tels que l’invasion des cellules cancéreuses, la structure des cardiomyocytes et les réponses de la matrice extracellulaire liées à la fibrose.
vinculin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VCL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VCL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VCL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VCL.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.