Plasmide Double Nickase (h) Vimentin: sc-400035-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Vimentin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Vimentin Double Nickase (h) et le plasmide Vimentin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant VIM. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Vimentin Antibody (E-5): sc-373717
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Vimentin | sc-400035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Vimentin | sc-400035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VIM code la vimentine, une protéine de filament intermédiaire de type III qui assure l’intégrité mécanique et organise le réseau du cytosquelette dans les cellules mésenchymateuses. La vimentine coordonne la forme cellulaire, l’adhérence et la migration via un dialogue avec l’actine et les microtubules, et participe à des processus tels que la transition épithélio-mésenchymateuse, la réparation des plaies et les réponses au stress. Son expression et sa phosphorylation sont régulées par des voies de signalisation incluant TGF-β, MAPK et Rho/ROCK, reliant le remodelage des filaments de vimentine à des changements dynamiques de la motilité. Des niveaux et une organisation de la vimentine dérégulés sont fréquemment associés à des phénotypes invasifs dans le cancer ainsi qu’à des pathologies fibroprolifératives et inflammatoires, ce qui en fait un marqueur clé et un nœud mécanistique central dans la recherche sur le cytosquelette et la TEM.
Vimentin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VIM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VIM. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VIM. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VIM.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.