Plásmido CRISPR de Activación (h) Vimentin: sc-400035-ACT

VIM codifica la vimentina, una proteína de filamento intermedio de tipo III que constituye un componente esencial de la red del citoesqueleto en células mesenquimales. La vimentina regula la forma celular, la resiliencia mecánica, el posicionamiento de orgánulos y la dinámica de adhesión, y se integra con los sistemas de actina y microtúbulos para coordinar programas de migración y respuesta a heridas. Su expresión se utiliza con frecuencia como marcador de la transición epitelio‑mesénquima (EMT) y se vincula a cambios en la remodelación del citoesqueleto, el recambio de las adhesiones focales y las vías de señalización que gobiernan la motilidad y la invasión. La expresión desregulada de vimentina se ha asociado con fibrosis, estados inflamatorios y fenotipos de progresión tumoral, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudiar la plasticidad celular y la adaptación al estrés.

Vimentin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de VIM sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Vimentin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus VIM en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional VIM, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Vimentin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo VIM y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Vimentin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Vimentin en células tumorales con expresión de VIM silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.