Plasmide CRISPR/Cas9 KO Villin (h): sc-400587

Présentation

VIL1 code la villine, une protéine épithéliale spécifique se liant à l’actine, particulièrement enrichie dans la bordure en brosse des entérocytes et des cellules du tubule proximal rénal, où elle regroupe, coiffe et sectionne la F‑actine afin de façonner l’architecture des microvillosités. Grâce à un remodelage de l’actine régulé par le Ca2+ et les phosphoinositides, la villine soutient la polarité épithéliale, le trafic membranaire à la surface apicale et la fonction barrière lors de la différenciation et de la régénération. VIL1 est largement utilisé comme marqueur de la lignée entérocytaire et de la maturation épithéliale, et une expression ou une localisation altérée de la villine est rapportée dans des contextes de lésion gastro-intestinale et d’inflammation, ainsi que dans la biologie des tumeurs épithéliales. Ces propriétés font de VIL1 un nœud pratique pour étudier la dynamique du cytosquelette, la morphogenèse épithéliale et le maintien des microvillosités.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Villin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VIL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VIL1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VIL1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Villin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VIL1 pour l'étude de la signalisation de Villin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VIL1 essentiels à la fonction de Villin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VIL1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Villin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Villin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VIL1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Villin plasmide HDR (h) et le Villin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VIL1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VIL1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.