Plasmide CRISPR/Cas9 KO VILIP-1 (h): sc-401100

Présentation

VSNL1 code la protéine 1 de type visinine (VILIP-1), un capteur neuronal de calcium de la famille « EF-hand » qui subit des changements conformationnels dépendants du Ca2+ et une association membranaire médiée par un « myristoyl switch ». VILIP-1 couple les transitoires de calcium intracellulaire à la régulation de la transduction du signal, en influençant les voies liées à l’AMPc/GMPC, la plasticité synaptique, la croissance des neurites et l’expression génique dépendante de l’activité. Dans les tissus humains, elle est enrichie dans le système nerveux et est couramment utilisée comme marqueur de l’état neuronal et de la dynamique de la signalisation calcique. Des altérations de l’expression de VSNL1/VILIP-1 et de l’homéostasie calcique ont été associées à la biologie de maladies neurodégénératives et neuropsychiatriques, étayant des études mécanistiques sur la vulnérabilité neuronale et les réponses au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VILIP-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VSNL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VSNL1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VSNL1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VILIP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VSNL1 pour l'étude de la signalisation de VILIP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VSNL1 essentiels à la fonction de VILIP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VSNL1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VILIP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le VILIP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VSNL1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VILIP-1 plasmide HDR (h) et le VILIP-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VSNL1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VSNL1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.