Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO Vigilin (m): sc-431035
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Vigilin Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Vigilin, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Vigilin Antibody (H-3): sc-271523
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Vigilin (m) | sc-431035 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin **Hdlbp** code la vigiline, une grande protéine liant l’ARN dotée de multiples domaines KH, qui s’associe aux ARNm et à des complexes ribonucléoprotéiques afin d’influencer la stabilité, la localisation et la traduction des transcrits. La vigiline a été associée à la régulation de l’expression de gènes du métabolisme des lipides et des stérols via des interactions avec des ARNm spécifiques, l’inscrivant dans des voies plus larges qui contrôlent l’équilibre énergétique cellulaire et l’homéostasie membranaire. Elle participe également au contrôle post‑transcriptionnel des gènes lors de la prolifération et des réponses au stress, en accord avec des rôles dans le traitement de l’ARN et la régulation de la traduction. La dérégulation des réseaux d’ARN associés à la vigiline a été étudiée dans des contextes impliquant des phénotypes métaboliques et des programmes d’expression génique altérés pertinents pour des mécanismes de maladie.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Vigilin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hdlbp dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hdlbp, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hdlbp à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Vigilin.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hdlbp pour l'étude de la signalisation de Vigilin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Hdlbp essentiels à la fonction de Vigilin
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hdlbp pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Vigilin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Vigilin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hdlbp. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Vigilin plasmide HDR (m) et le Vigilin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hdlbp pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hdlbp définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.