VHR Double Nickase Plasmid (h): sc-405733-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das VHR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- VHR Double-Nickase-Plasmid (h) und VHR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DUSP3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: VHR: sc-374161
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
VHR Double Nickase Plasmid (h) | sc-405733-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
VHR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405733-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dual-Spezifitätsphosphatase 3 (DUSP3), auch bekannt als Vaccinia-H1-verwandte Phosphatase (VHR), ist eine zytosolische Dual-Spezifitätsphosphatase, die Phosphotyrosin- sowie Phosphoserin/-threonin-Reste an MAPKs dephosphoryliert; eine Aktivität gegenüber Mitgliedern der ERK- und JNK-Familie wurde beschrieben. Durch die Modulation von Stärke und Dauer der MAPK-Signalübertragung trägt VHR zur Kontrolle der Zellzyklusprogression, der Stressantwort-Signalgebung und von Transkriptionsprogrammen downstream von Wachstumsfaktor- und Zytokin-Signalen bei. DUSP3 wurde zudem mit der Regulation von Immunsignalen und zellulärer Proliferation in Verbindung gebracht – über seine Effekte auf den Phosphorylierungszustand von Kinasen und die nachgeschaltete Genexpression. Eine veränderte Expression oder Aktivität von DUSP3/VHR wurde im Kontext onkogener Signalwege sowie in der Biologie hämatologischer und solider Tumoren beschrieben, was mechanistische Studien zur Umverdrahtung von Signalwegen in krankheitsrelevanten Modellen motiviert.
VHR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DUSP3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DUSP3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DUSP3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DUSP3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.