VEGF-D CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401669-ACT

Humanes **VEGFD** kodiert **VEGF-D**, einen sezernierten Wachstumsfaktor, der hauptsächlich über **VEGFR-3** signalisiert und nach proteolytischer Prozessierung auch **VEGFR-2** aktivieren kann, um Proliferation, Migration und Überleben lymphatischer und vaskulärer Endothelzellen zu fördern. VEGF-D trägt zur **Lymphangiogenese**, zum **vaskulären Remodeling** und zu einer extrazellulärmatrix-gekoppelten Signalnetzwerk-Interaktion mit den **PI3K–AKT**-, **MAPK/ERK**- und **SRC-Familien**-Signalwegen bei. Seine Expression wird durch entwicklungsbiologische und inflammatorische Signale reguliert und wird häufig im Kontext von Endothel-Differenzierung, Gewebeflüssigkeitshomöostase und Immunzell-Trafficking untersucht. Eine dysregulierte VEGF-D-Aktivität wurde mit pathologischem lymphatischem Remodeling sowie tumorassoziierten vaskulären/lymphatischen Veränderungen in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für mechanistische Modelle der Krebsbiologie und entzündlicher Erkrankungen unterstreicht.

VEGF-D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen VEGFD-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

VEGF-D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des VEGFD-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der VEGFD-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen VEGF-D-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native VEGFD-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von VEGF-D-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des VEGF-D-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem VEGFD-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.