VEGF-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423666
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- VEGF-B Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im VEGF-B-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: VEGF-B: sc-101582
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
VEGF-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-423666 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Vegfb kodiert den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor B (VEGF‑B), einen sezernierten Liganden der VEGF‑Familie, der vor allem über VEGFR1 (FLT1) und Neuropiline signalisiert, um das Verhalten von Endothelzellen und die vaskuläre Homöostase zu modulieren. Im Gegensatz zum stark angiogenen VEGF‑A wird VEGF‑B häufig mit dem Überleben von Endothelzellen, der Stabilisierung von Gefäßen sowie der Regulation der Lipidaufnahme und des Stoffwechsels in Geweben mit hohem oxidativem Bedarf in Verbindung gebracht. Die VEGF‑B‑abhängige Signalübertragung überschneidet sich mit PI3K‑AKT‑ und MAPK‑Signalwegen und kann die Mitochondrienfunktion sowie Programme des Fettsäuretransports beeinflussen. Veränderungen der VEGF‑B‑Aktivität wurden in Zusammenhängen von metabolischem Stress und der kardiovaskulären Biologie untersucht, darunter vaskuläre Dysfunktion und die Anfälligkeit von Geweben für ischämische Schäden.
Das VEGF-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vegfb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vegfb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vegfb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VEGF-B-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vegfb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VEGF-B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Vegfb-Exone abzielen, die für die VEGF-B-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vegfb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom VEGF-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom VEGF-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vegfb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VEGF-B HDR-Plasmid (m) und VEGF-B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vegfb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vegfb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.