VE-cadherin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401695
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- VE-cadherin-2 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im VE-cadherin-2-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: VE-cadherin-2: sc-515467
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
VE-cadherin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-401695 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
PCDH12 kodiert VE-Cadherin-2, ein calciumabhängiges Adhäsionsmolekül, das in vaskulären Endothelzellen stark angereichert ist und stabile Zell-Zell-Kontakte sowie eine koordinierte Barrierebildung unterstützt. Durch die Einbindung von Cadherin–Catenin-Komplexen und die Ankopplung an das Aktin-Zytoskelett trägt VE-Cadherin-2 zur Organisation von Adherens Junctions, zur endothelialen Polarität und zur Regulation der Permeabilität während des angiogenen Remodelings bei. Seine Aktivität überschneidet sich mit Signalprogrammen, die die Dynamik der Zellkontakte feinabstimmen, einschließlich Signalwegen, die die zytoskelettale Spannung und endotheliale Antworten auf entzündliche oder mechanische Reize beeinflussen. Eine Dysregulation der endothelialen Adhäsion und Barrierekontrolle ist für Phänotypen vaskulärer Dysfunktion relevant und bietet einen mechanistischen Ansatzpunkt, um die mikrovaskuläre Integrität in krankheitsrelevanten Modellen zu untersuchen.
Das VE-cadherin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PCDH12-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PCDH12-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PCDH12 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VE-cadherin-2-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PCDH12-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VE-cadherin-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf PCDH12-Exone abzielen, die für die VE-cadherin-2-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere PCDH12-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom VE-cadherin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VE-cadherin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PCDH12-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VE-cadherin-2 HDR-Plasmid (h) und VE-cadherin-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PCDH12-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PCDH12-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.