Plasmide CRISPR/Cas9 KO Vav2 (h): sc-401490

Présentation

VAV2 code pour Vav2, un facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) multidomaine qui active des GTPases de la famille Rho telles que RAC1 et CDC42 en aval des récepteurs à activité tyrosine kinase et de la signalisation des intégrines. Par l’intermédiaire de son cœur catalytique DH-PH et d’interactions médiées par les domaines SH2/SH3, Vav2 coordonne le remodelage du cytosquelette d’actine, la formation de replis membranaires (membrane ruffling) et la dynamique des adhérences focales, qui soutiennent la migration et l’adhésion cellulaires. La signalisation dépendante de Vav2 s’entrecroise avec des voies incluant PI3K, MAPK et les réseaux de kinases de la famille Src, reliant des signaux extracellulaires à des réponses transcriptionnelles et cytosquelettiques. Une activité ou une expression dérégulée de VAV2 a été associée à des modifications du comportement invasif et à un remaniement des réseaux de signalisation dans plusieurs contextes pertinents pour des maladies, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la motilité et de la transduction du signal.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Vav2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VAV2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VAV2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VAV2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Vav2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VAV2 pour l'étude de la signalisation de Vav2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VAV2 essentiels à la fonction de Vav2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VAV2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Vav2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Vav2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VAV2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Vav2 plasmide HDR (h) et le Vav2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VAV2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VAV2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.