Plásmido CRISPR de Activación (h) Vav2: sc-401490-ACT

El gen humano **VAV2** codifica **Vav2**, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) de la familia Rho que cataliza el intercambio de GDP por GTP en **Rac1, RhoA y Cdc42** para coordinar la remodelación del citoesqueleto de actina, la adhesión celular y la migración direccional. Vav2 actúa aguas abajo de receptores tirosina cinasa, integrinas y receptores inmunitarios, conectando señales extracelulares con programas citosqueléticos y transcripcionales mediante vías que convergen con la señalización de **MAPK** y **PI3K**. A través de estas funciones, Vav2 contribuye a regular la morfología celular, la endocitosis y los cambios dependientes de señales en la motilidad y los fenotipos relacionados con la invasión. La expresión o señalización desregulada de **VAV2** se ha asociado con programas aberrantes de proliferación y migración en biología del cáncer, así como con alteraciones en contextos de señalización inmunitaria y vascular relevantes para mecanismos de enfermedad.

Vav2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de VAV2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Vav2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus VAV2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional VAV2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Vav2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo VAV2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Vav2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Vav2 en células tumorales con expresión de VAV2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.