Plasmide Double Nickase (h) V-ATPase α1: sc-403882-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) V-ATPase α1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide V-ATPase α1 Double Nickase (h) et le plasmide V-ATPase α1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATP6V1A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: V-ATPase α1 Antibody (4F5): sc-293336
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) V-ATPase α1 | sc-403882-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) V-ATPase α1 | sc-403882-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V1A code la sous-unité catalytique A du domaine V1 de la H\+-ATPase vacuolaire (V-ATPase) α1, un composant central de la pompe à protons dépendante de l’ATP qui acidifie les endosomes, les lysosomes et les vésicules sécrétoires. En contrôlant le pH des organites, la V-ATPase α1 soutient l’endocytose médiée par les récepteurs, le flux autophagique, la dégradation lysosomale, le trafic vésiculaire et le couplage à la détection des nutriments par mTORC1 à la surface du lysosome. Une activité correcte de la V-ATPase est également nécessaire au traitement des protéines et des lipides dans l’appareil de Golgi et les endosomes, influençant la présentation antigénique et l’extinction du signal. Une acidification dépendante de la V-ATPase dérégulée a été associée à la neurodégénérescence, à l’adaptation métabolique et à l’invasion des cellules tumorales, ainsi qu’à des défauts de protéostasie et de fonction synaptique, faisant d’ATP6V1A une cible utile pour des études mécanistiques axées sur des voies.
V-ATPase α1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP6V1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP6V1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP6V1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP6V1A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.