UVSSA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408933

Descripción general

UVSSA (proteína andamiaje A estimulada por UV) es un factor clave en la reparación por escisión de nucleótidos acoplada a la transcripción (TC-NER), donde ayuda a restablecer la transcripción después de que la ARN polimerasa II se detiene en lesiones del ADN inducidas por UV. La proteína humana UVSSA coopera con CSA/ERCC8 y CSB/ERCC6 y favorece el reclutamiento y la estabilización de la desubiquitinasa USP7, respaldando una dinámica regulada de ubiquitinación durante el ensamblaje del complejo de reparación. A través de estas actividades, UVSSA contribuye a la integridad del genoma, a la recuperación de la transcripción tras el estrés genotóxico y a las respuestas celulares a la irradiación UV. Los defectos en la TC-NER mediada por UVSSA se asocian con sensibilidad a la UV y con trastornos dentro del espectro del síndrome de Cockayne, lo que la hace relevante para estudiar la disfunción de las vías de reparación del ADN y el fallo transcripcional inducido por estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UVSSA (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen UVSSA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del UVSSA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de UVSSA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UVSSA.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en UVSSA para la investigación de la señalización de UVSSA, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de UVSSA críticos para la función de UVSSA
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de UVSSA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UVSSA CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido UVSSA CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus UVSSA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UVSSA (h) y el plásmido HDR UVSSA (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología UVSSA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana UVSSA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.