Plasmide CRISPR/Cas9 KO utrophin (h2): sc-400522-KO-2

Présentation

UTRN code pour l’utrophine, une grande protéine de liaison du cytosquelette qui relie le cytosquelette d’actine au complexe des glycoprotéines associées à la dystrophine au niveau du sarcolemme et d’autres domaines membranaires. L’utrophine contribue à la stabilité membranaire, à la mécanotransduction et à l’organisation des structures d’adhérence cellule–matrice, soutenant la signalisation et l’intégrité structurale dans le muscle strié et d’autres tissus. Grâce à ses répétitions de type spectrine et à ses interfaces d’interaction, l’utrophine aide à coordonner le remodelage du cytosquelette et les processus d’échafaudage associés à la membrane. Les altérations de la régulation de UTRN et l’expression compensatoire de l’utrophine sont largement étudiées dans le contexte de la biologie des dystrophies musculaires et de phénotypes apparentés de fragilité membranaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO utrophin (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UTRN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UTRN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UTRN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine utrophin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UTRN pour l'étude de la signalisation de utrophin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UTRN essentiels à la fonction de utrophin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UTRN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le utrophin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le utrophin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UTRN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le utrophin plasmide HDR (h) et le utrophin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UTRN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UTRN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.