Usherin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423630

Descripción general

Ush2a codifica la usherina, una gran proteína transmembrana asociada a la matriz extracelular, enriquecida en el complejo de membrana periciliar de los epitelios sensoriales, donde contribuye al soporte de la estructura mecanosensorial y a la integridad celular a largo plazo. En el ratón, la usherina contribuye a la organización de las estereocilias y al mantenimiento de los fotorreceptores al coordinar complejos proteicos implicados en la adhesión celular, el tráfico ciliar y el acoplamiento al citoesqueleto. La alteración de USH2A se asocia estrechamente con el síndrome de Usher tipo II y la retinitis pigmentosa, lo que vincula este gen con vías que regulan la señalización dependiente de los cilios y la homeostasis de las neuronas sensoriales. En consecuencia, los modelos con pérdida de función de Ush2a se utilizan para investigar el transporte ciliar, el ensamblaje del andamiaje extracelular y las respuestas al estrés relacionadas con la degeneración en contextos de retina y oído interno.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Usherin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ush2a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ush2a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ush2a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Usherin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ush2a para la investigación de la señalización de Usherin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ush2a críticos para la función de Usherin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ush2a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Usherin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Usherin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ush2a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Usherin (m) y el plásmido HDR Usherin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ush2a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ush2a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.