UPIIIa CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423622

Übersicht

Upk3a kodiert Uroplakin IIIa (UPIIIa), eine tetraspaninähnliche Komponente der apikalen Membran des Urothels, die an der Assemblierung von Uroplakin-Plaques beteiligt ist und zur Aufrechterhaltung der Permeabilitätsbarriere der Harnwege beiträgt. UPIIIa bildet Komplexe mit anderen Uroplakinen, um die terminale Differenzierung von Umbrella-Zellen zu unterstützen und den Membrantransport sowie die mechanische Stabilität während der Füllung und Entleerung der Harnblase zu regulieren. Eine Störung der Uroplakin-Zusammensetzung kann die Integrität des Epithels beeinträchtigen, urotheliale Differenzierungsprogramme verändern und entzündliche Reaktionen fördern, die mit Funktionsstörungen der Harnwege in Zusammenhang stehen. In Mausmodellen wird Upk3a eingesetzt, um Signalwege zu untersuchen, die die Ausbildung der epithelialen Barriere, das urotheliale Remodeling und Wirt–Pathogen-Interaktionen an der Blasenoberfläche steuern.

Das UPIIIa CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Upk3a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Upk3a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Upk3a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UPIIIa-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Upk3a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UPIIIa-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Upk3a-Exone abzielen, die für die UPIIIa-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Upk3a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UPIIIa CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UPIIIa CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Upk3a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UPIIIa HDR-Plasmid (m) und UPIIIa HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Upk3a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Upk3a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.