UPII CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423621

Übersicht

Upk2 kodiert Uroplakin II (UPII), einen mit Tetraspaninen assoziierten Differenzierungsmarker der urothelialen Umbrella-Zellen, der zur Assemblierung der apikalen urothelialen Plaque und zur Aufrechterhaltung der Urin–Blut-Barriere beiträgt. UPII ist an Membrantransportprozessen und an der Bildung von Uroplakin-Komplexen beteiligt, die spezialisierte Lipid-Mikrodomänen organisieren und so die epitheliale Polarität und Barrierefunktion unterstützen. Eine veränderte Uroplakin-Zusammensetzung oder gestörte Differenzierungsprogramme im Urothel wurden mit beeinträchtigter Barriereintegrität, Entzündungen und einer erhöhten Anfälligkeit für Verletzungen der Harnwege in Verbindung gebracht. In Mausmodellen wird die Upk2-Expression häufig genutzt, um die Identität der urothelialen Zelllinie und epitheliales Remodeling in der Blasenpathophysiologie zu untersuchen.

Das UPII CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Upk2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Upk2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Upk2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UPII-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Upk2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UPII-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Upk2-Exone abzielen, die für die UPII-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Upk2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UPII CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UPII CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Upk2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UPII HDR-Plasmid (m) und UPII HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Upk2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Upk2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.