Plasmide CRISPR/Cas9 KO UPase (m): sc-423623

Présentation

Le gène murin Upp1 code l’uridine phosphorylase (UPase), une enzyme clé de la voie de sauvetage des pyrimidines qui catalyse la phosphorolyse réversible de l’uridine en uracile et ribose-1-phosphate. En régulant les pools cellulaires de nucléosides, l’UPase influence la disponibilité des précurseurs de l’ARN et de l’ADN et s’intègre aux programmes du métabolisme des nucléotides qui soutiennent la prolifération et l’adaptation métabolique. L’expression de Upp1 et l’activité de l’UPase ont été étudiées dans des contextes de remodelage tissulaire et de réponses au stress, où des modifications du renouvellement des nucléosides peuvent altérer l’homéostasie cellulaire. En tant que nœud métabolique, Upp1 est fréquemment utilisé pour explorer les liens entre le métabolisme des pyrimidines, l’équilibre mitochondrial et redox, ainsi que les interactions entre voies influençant les phénotypes de croissance et de survie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UPase (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Upp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Upp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Upp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UPase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Upp1 pour l'étude de la signalisation de UPase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Upp1 essentiels à la fonction de UPase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Upp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UPase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UPase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Upp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UPase plasmide HDR (m) et le UPase (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Upp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Upp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.