Plásmido CRISPR de Activación (h) UNC93B1: sc-404369-ACT

UNC93B1 (homólogo B1 de UNC93) es una proteína de membrana del retículo endoplásmico que controla el tráfico y la competencia de señalización de los receptores tipo Toll (TLR) que detectan ácidos nucleicos, incluidos TLR3, TLR7, TLR8 y TLR9. Al actuar como chaperona y transportar estos receptores desde el RE hacia compartimentos endolisosomales, UNC93B1 ayuda a establecer el umbral de activación del interferón tipo I y de la vía de NF-κB aguas abajo de ácidos nucleicos asociados a patógenos y a daño celular. Una función alterada de UNC93B1 puede perturbar el reconocimiento inmunitario innato, la producción de citocinas y la activación de células presentadoras de antígeno, lo que la vincula con la desregulación inmunitaria y con la susceptibilidad a fenotipos inflamatorios impulsados por infecciones. Como regulador de la compartimentalización endosomal de los TLR, UNC93B1 se estudia con frecuencia en monocitos, células dendríticas, células B y modelos epiteliales para diseccionar los circuitos de la inmunidad innata.

UNC93B1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UNC93B1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UNC93B1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UNC93B1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UNC93B1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UNC93B1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UNC93B1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UNC93B1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UNC93B1 en células tumorales con expresión de UNC93B1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.