Plasmide CRISPR d'Activation (h) UGTREL1: sc-411438-ACT

SLC35B1 code pour le transporteur humain de sucres nucléotidiques UGTREL1, une protéine membranaire multipasse qui soutient la glycosylation en fournissant des sucres activés vers le côté luminal du réticulum endoplasmique et/ou de l’appareil de Golgi. En régulant la disponibilité des substrats pour les glycosyltransférases, UGTREL1 influence la glycosylation N-liée des protéines, le contrôle qualité et le trafic, avec des effets en aval sur la maturation des récepteurs et l’homéostasie de la voie sécrétoire. La perturbation du transport des sucres nucléotidiques peut remodeler les glycannes de surface cellulaire et modifier la signalisation, l’adhérence et les réponses au stress, ce qui rend SLC35B1 pertinent pour l’étude de la glycoprotéostasie et du recâblage des voies dans des états cellulaires associés aux maladies. Par conséquent, SLC35B1 est fréquemment étudié dans le contexte du couplage métabolique–sécrétoire, de la fonction des organites et de la régulation, dépendante des glycannes, des voies immunitaires et des voies des facteurs de croissance.

UGTREL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC35B1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UGTREL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC35B1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC35B1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UGTREL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC35B1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UGTREL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UGTREL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC35B1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.