UGT8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-423604-KO-2

Descripción general

Ugt8a codifica la UDP-galactosa:ceramida galactosiltransferasa (UGT8), una glicosiltransferasa residente del aparato de Golgi que cataliza la formación de galactosilceramida, un precursor clave del sulfatido y de otros galactolípidos. Este paso enzimático sostiene la biosíntesis de esfingolípidos y de lípidos de la mielina, influyendo en la composición de los microdominios de membrana, en las interacciones axón–glía y en la maduración de los oligodendrocitos en el sistema nervioso del ratón. Las alteraciones del equilibrio de galactolípidos se han asociado con una mielinización desregulada y fenotipos neuroinflamatorios, lo que convierte a UGT8 en un punto relevante para estudiar la biología neuronal y glial impulsada por lípidos. La actividad de UGT8 también se utiliza para investigar de forma más amplia el flujo de ceramida y la remodelación de la vía de los glicoesfingolípidos en condiciones de desarrollo o de estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UGT8 (m2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ugt8a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ugt8a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ugt8a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UGT8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ugt8a para la investigación de la señalización de UGT8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ugt8a críticos para la función de UGT8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ugt8a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UGT8 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UGT8 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ugt8a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UGT8 (m) y el plásmido HDR UGT8 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ugt8a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ugt8a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.