Plásmido CRISPR de Activación (h) UGT2B: sc-404208-ACT

El UGT2B4 humano codifica una UDP-glucuronosiltransferasa de la subfamilia UGT2B que cataliza la glucuronidación de esteroides endógenos, metabolitos relacionados con los ácidos biliares y diversos xenobióticos, aumentando su solubilidad para su eliminación. Esta actividad enzimática sustenta el metabolismo de fase II en redes de desintoxicación asociadas al retículo endoplásmico y se integra con las vías de depuración hepática reguladas por la señalización de receptores nucleares y la homeostasis redox. La variación en la expresión o la actividad de UGT2B4 puede modificar el destino de las hormonas esteroideas y el procesamiento de xenobióticos, por lo que resulta relevante para estudios sobre el metabolismo interindividual de fármacos, la regulación endocrina y fenotipos de estrés metabólico. Como parte del panorama funcional más amplio de UGT2B, UGT2B4 se examina con frecuencia junto con sistemas de transporte y conjugación que, en conjunto, determinan la exposición celular a pequeñas moléculas bioactivas.

UGT2B4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UGT2B4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UGT2B4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UGT2B4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UGT2B4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UGT2B4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UGT2B4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UGT2B4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UGT2B4 en células tumorales con expresión de UGT2B4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.