UGT2B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404208-ACT

Das humane Gen UGT2B4 kodiert eine UDP-Glucuronosyltransferase der UGT2B-Unterfamilie, die die Glucuronidierung endogener Steroide, gallensäurebezogener Metabolite sowie vielfältiger Xenobiotika katalysiert und dadurch deren Löslichkeit für die Ausscheidung erhöht. Diese enzymatische Aktivität unterstützt den Phase-II-Stoffwechsel in endoplasmatisches Retikulum-assoziierten Entgiftungsnetzwerken und ist mit hepatischen Clearance-Pfaden verknüpft, die durch nukleäre Rezeptorsignalgebung und Redox-Homöostase reguliert werden. Variationen in der Expression oder Aktivität von UGT2B4 können die Verstoffwechselung von Steroidhormonen und den Umgang mit Xenobiotika verschieben und sind daher relevant für Studien zur interindividuellen Arzneistoffmetabolisierung, endokrinen Regulation und Phänotypen metabolischen Stresses. Als Teil der breiteren funktionellen UGT2B-Landschaft wird UGT2B4 häufig zusammen mit Transport- und Konjugationssystemen untersucht, die gemeinsam die zelluläre Exposition gegenüber bioaktiven kleinen Molekülen prägen.

UGT2B4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UGT2B4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UGT2B4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UGT2B4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UGT2B4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UGT2B4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UGT2B4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UGT2B4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UGT2B4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UGT2B4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.