Plásmido Doble Nickase (h) UCP4: sc-417530-NIC

SLC25A27 codifica la proteína desacoplante 4 (UCP4), un transportador de la membrana mitocondrial interna que modula la fuga de protones y la eficiencia de acoplamiento mitocondrial, moldeando la producción de fosforilación oxidativa y la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno. UCP4 está enriquecida en tejidos neuronales y se ha vinculado con la regulación del potencial de membrana mitocondrial, el manejo del calcio y las respuestas celulares al estrés que influyen en el metabolismo y la supervivencia neuronal. A través de sus efectos sobre la bioenergética mitocondrial, UCP4 se relaciona con vías que gobiernan el equilibrio redox y la muerte celular programada, lo que la hace relevante para estudios de neurodegeneración y vulnerabilidad metabólica. La alteración de la expresión o actividad de UCP4 se ha asociado con una homeostasis energética perturbada en contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda su investigación mecanística en modelos de células humanas.

UCP4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC25A27 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC25A27. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC25A27. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC25A27 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.