UCP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423597

Übersicht

Ucp3 kodiert das mitochondriale Entkopplungsprotein 3 (UCP3), einen Carrier in der inneren Membran, der den Protonenleckstrom und die Kopplungseffizienz während der oxidativen Phosphorylierung moduliert. In der Skelettmuskulatur und im braunen Fettgewebe der Maus wird UCP3 mit der Nutzung von Fettsäuren, der Regulation mitochondrialer reaktiver Sauerstoffspezies und adaptiven thermogenen Antworten auf Veränderungen der Nährstoffverfügbarkeit in Verbindung gebracht. Durch seinen Einfluss auf die mitochondriale Bioenergetik und den Lipidstoffwechsel ist UCP3 an Signalwegen beteiligt, die für Energiehomöostase, Insulinsensitivität und oxidativen Stress relevant sind. Eine veränderte Ucp3-Expression oder -Aktivität wird häufig in Modellen für Adipositas, metabolisches Syndrom und metabolische Anpassungen des Muskels untersucht.

Das UCP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ucp3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ucp3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ucp3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UCP3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ucp3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UCP3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ucp3-Exone abzielen, die für die UCP3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ucp3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UCP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UCP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ucp3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UCP3 HDR-Plasmid (m) und UCP3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ucp3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ucp3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.