UCP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400319-ACT

UCP2 (Entkopplungsprotein 2) ist ein Transporter der inneren Mitochondrienmembran, der durch die Modulation des Protonenlecks die Effizienz der oxidativen Phosphorylierung, das mitochondriale Membranpotenzial und die zelluläre ATP-Produktion beeinflusst. Indem UCP2 die Bildung reaktiver Sauerstoffspezies und den mitochondrialen Redoxzustand fein abstimmt, wirkt es auf Stressantworten, metabolische Umprogrammierung und Überlebenssignale im Zusammenhang mit der Nährstoffverfügbarkeit ein. Die UCP2-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die Insulinsekretion, Fettsäurenutzung, Inflammasom-Signalisierung und mitochondriale Qualitätskontrolle steuern, und ist damit relevant für Studien zu Stoffwechselstörungen, Entzündung und der Bioenergetik von Tumorzellen. Eine fehlregulierte UCP2-Expression wurde in verschiedenen Krankheitskontexten mit einer veränderten Bewältigung von oxidativem Stress und einem veränderten mitochondrialen Stoffwechsel in Verbindung gebracht, was UCP2 als mechanistischen Knotenpunkt in der mitochondrialen und immunmetabolischen Forschung unterstützt.

UCP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UCP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UCP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UCP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UCP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UCP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UCP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UCP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UCP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UCP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.