UCK1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423608

Descripción general

Uck1 codifica la uridina-citidina quinasa 1 (UCK1), una enzima citosólica de la vía de rescate que fosforila la uridina y la citidina a UMP y CMP, aportando nucleótidos de pirimidina para la síntesis de ARN, la replicación del ADN y el metabolismo de los fosfolípidos de membrana. Al regular el equilibrio de los reservorios de nucleótidos, UCK1 influye en la capacidad proliferativa, la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés vinculadas a las demandas de replicación y transcripción. En sistemas murinos, la actividad de UCK1 se examina con frecuencia junto con la síntesis de novo de pirimidinas y el transporte de nucleósidos para comprender la reprogramación metabólica y el flujo compensatorio dentro de la homeostasis de nucleótidos. La alteración del metabolismo de pirimidinas es una característica recurrente de trastornos que implican proliferación desregulada y mantenimiento del genoma, lo que convierte a Uck1 en un nodo útil para estudios mecanísticos centrados en la vía.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UCK1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Uck1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Uck1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Uck1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UCK1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Uck1 para la investigación de la señalización de UCK1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Uck1 críticos para la función de UCK1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Uck1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UCK1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UCK1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Uck1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UCK1 (m) y el plásmido HDR UCK1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Uck1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Uck1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.