UBXN2B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407871

Descripción general

UBXN2B (proteína de dominio UBX 2B) es un adaptador de la familia UBX implicado en el control de calidad de proteínas dependiente de ubiquitina, al enlazar sustratos poliubiquitinados con la ATPasa AAA+ p97/VCP para su extracción y el procesamiento proteasomal posterior. A través de esta función, UBXN2B contribuye a la regulación de la degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD), al recambio de proteínas mal plegadas o dañadas y al mantenimiento de la proteostasis durante el estrés celular. La alteración de las redes de cofactores de p97–UBX es ampliamente relevante para vías que gobiernan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la señalización de estrés, que determinan la viabilidad celular y los programas de diferenciación. Como nodo en los circuitos del sistema ubiquitina–proteasoma (UPS), UBXN2B es de interés para estudios mecanísticos en contextos donde el desequilibrio de la proteostasis y la eliminación aberrante de proteínas contribuyen a fenotipos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UBXN2B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen UBXN2B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del UBXN2B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de UBXN2B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UBXN2B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en UBXN2B para la investigación de la señalización de UBXN2B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de UBXN2B críticos para la función de UBXN2B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de UBXN2B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UBXN2B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido UBXN2B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus UBXN2B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UBXN2B (h) y el plásmido HDR UBXN2B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología UBXN2B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana UBXN2B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.